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准确的血型鉴定及交叉配血是临床安全有效输血的重要保证

发布人: 更新时间:2011-12-16

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准确的血型鉴定及交叉配血是临床安全有效输血的重要保证。输血配合是选择用于受者的血液,使输血的成分能在受者体内有效存活,无不良反应,即输入的红细胞在受者体内必须不凝集或不溶血,输入的血浆成分不导致受者自身红细胞显著破坏,才能使受者获得恢复健康所需的血液[1]。影响血型鉴定和交叉配血的因素很多,笔者结合工作实际就实验过程中出现的一些问题及其对策报告如下。

??? 1? 标本和试剂因素

??? 1.1? 标本? 交叉配血和血型鉴定血液标本的严格要求是安全输血的关键性措施之一。首先要对标本进行科学管理,确保标本一一对应,其标识、血液量、红细胞或血浆的质量符合实验要求和受者血液的身体状态,同时避免血样的稀释和溶血的产生。标本一般要求离体后尽快实验,最长不能超过3d,每次输血后受血者和供血者的血标本应在2℃~8℃保存7d[2]。患者的药物使用有时也对实验有一定影响,一般受者使用肝素治疗,应用硫酸鱼精蛋白对抗使标本凝结;如果受者使用右旋糖酐、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)等治疗,应注意将红细胞洗涤。

??? 1.2? 试剂因素? 血型定型试剂是做好定型的基础。现在单克隆试剂是通过杂交瘤技术生产的,其效价、特异性、亲和力都较人血清有很大进步,但试剂的运输、贮存等条件不适可导致试剂变质失效,造成鉴定或配血错误。在实验前进行试剂外观、效价等项目质量控制。不同抗凝剂的血液制备的标准红细胞质量也不同,各实验室依据要求正确配制红细胞浓度。常见的抗D试剂主要有IgM型、IgG型胶IgM+IgG型三种。

??? 2? ABO血型鉴定和交叉配血

??? 2.1? 冷凝集素

??? 在ABO血型鉴定和交叉配血的过程中,冷凝集素是影响ABO血型正反不符和交叉配血不合的常见原因。正常人血清中冷凝集素效价一般不高,且在4℃以下时才有活性。但由于人免疫系统的差异,在恶性肿瘤或病原体感染后有时冷反应性自身抗体可异常增高,造成溶血性贫血。这种冷凝集素效价在4℃可高于1000,用37℃生理盐水洗涤红细胞,操作时在37℃环境可以排除冷凝集素的干扰。

??? 2.2? 自身免疫性溶血性贫血

??? 红细胞被自身抗体强烈致敏后将干扰ABO定型,且自身抗体的存在会导致交叉配血不合,选择合适的试验方法对红细胞上结合的抗体做放散处理,确定抗体的特异性。如果抗体属于同种抗体,则交叉配血时应选取该抗原阴性的献血者的血液。如果该抗体无法确定特异性,则交叉配血时要根据患者自身红细胞与自身血清的对照反应选取较弱反应的献血者血液,因为自身抗体的干扰而发生ABO正反定型不相符时,可用37℃~45℃生理盐水洗涤红细胞三次,或者用放散后的红细胞(放散方法需不破坏红细胞结构),血清定型则可用洗涤或放散后的红细胞将血清中的自身抗体吸收后再进行。

??? 2.3? 弱凝集

??? 血型试验是抗原抗体反应,当患者红细胞上抗原异常或血清中存在ABO血型以外的不规则抗体时,可能会导致减弱的或缺少的凝集反应。抗原异常包括:①亚型,这种亚型红细胞抗原性较弱,可以通过亚型定型试剂来具体定型。②红细胞抗原形成不足或敏感性降低,如新生儿、老年人及少数恶病质患者。鉴定血型时要注意正反定型的结合,加用抗H和抗A,B型标准血清、A2红细胞等检查唾液中的血型物质,必要时作吸收放散试验以确定。若血清中存在不规则抗体可在反定型用O细胞加以鉴定,有些亚型因为抗原的某些位点缺失,也会产生相对于缺失抗原位点的抗体,这些抗体的产生有助于亚型的判定。

??? 2.4? 细菌性凝集

??? 常见有类B凝集,A型或O型病人因大肠杆菌O86感染,从而使红细胞上获得类B抗原,能与抗B抗体发生凝集,表现为B 或AB型。其不受温度影响,病情好转类B凝集即消失。另外红细胞被细菌或细菌酶污染,红细胞上的T抗原被激活,与供血者中抗T抗体发生凝集。此种凝集在4℃和37℃之间随着温度的升高凝集程度逐渐减弱,在37℃时最弱或消失。

??? 2.5? 混合外观凝集现象

??? 出现混合外观凝集的情况时一般要核对标本,必要时可重新抽取血样。患者在近期有过骨髓移植或输血史、胎盘出血和白血病等应在疾病恢复后再确定血型。其他原因如嵌合现象、A3亚型及Tn多凝集反应等在定型时可帮助正确判断血型。

??? 2.6? 不规则抗体及亚型

??? 血型试验是抗原抗体反应,当患者血清中存在ABO型以外的IgM或IgG和IgM混合型不规则抗体时,必然会导致ABO正反定型不一致。可通过测定唾液中的血型物质来鉴定ABO血型。由于受检者红细胞上有弱抗原,且抗原表达性特别弱,在纸片定型中很可能被错误定型,另外抗A/抗B/抗AB血清的效价低或Ac/Bc/Oc等其他因素的影响,正反定型不相符,也可能被错定或无法确认[3],应用试管盐水法镜检显示抗A/抗B/抗AB管呈弱的混合外观,正反定型相符,且经吸收放散试验进一步确定相应的亚型。由于某些亚型红细胞与抗A,B血清呈现出特异性反应,因此同时采用抗A,B血清,而在反定型时加入O细胞可以检出部分不规则抗体。对ABO血型正反定型不一致的标本,正定型时加入抗H有助于检测红细胞表面H抗原的量,对鉴别亚型具有重要意义,同时有助于发现稀有血型,如孟买型等[4]。

??? 2.7? 假凝集

??? 血清在室温和37℃中,使红细胞出现了假凝集,造成配血错误。常见于某些肝病、传染病、多发性骨髓瘤、霍金氏病、心肌梗塞、感染等病,或用纸片或玻片作血型鉴定时,时间过长水份蒸发引起红细胞发生凝集,这种凝集在镜下为缗钱状,可看清红细胞形态,患者红细胞直接抗人球蛋白试验阴性,用生理盐水稀释或洗涤红细胞可使凝集消失。

??? 3? Rh定型试验

??? Rh血型系统可能是红细胞血型系中最复杂的一个血型系[1]。常规条件下只作Rh(D)定型。Rh(D)阴性的受者必须接受Rh(D)阴性的血液。临床输血前检查Rh(D)血型是一个常规项目,但部分小型医院目前还未开展这类项目,这对输血安全带来很大隐患。鉴定Rh血型抗原有不同的血清血技术,主要按定型试剂的性质而确定,因此在作血型签定时,应对所用的定型试剂有全面的了解,才能避免假阳性和假阴性,正确地获得定型结果。Rh血型定型方法主要包括三种方法,即玻片法、盐水法和酶或间接抗球蛋白试验。试验过程中对照系统应包括试剂对照和抗原阳性阴性对照,并对采用的试验介质、浓度、温度、离心条件等严格控制。Rh血型弱D是D的弱表现形式,即使很弱仍可能引起免疫反应,若将弱D型血输给D阴性受者,有可能免疫受者,使之产生抗D;弱D红细胞输入血清中已有抗D的受血者,输入红细胞会被加速破坏,从而引起溶血性输血反应,对于初筛为D阴性的献血者,要分别用不同批次的IgG抗D试剂间接抗人球法进行Rh阴性确认,供者弱D型血作为D阳性血发放。临床对于受者只做IgM抗D试验,若为阴性,不再做弱D检测,应把受者当作D阴性,并输注D阴性血。另外标本污染和错误、操作者自身技术及判断错误、病人用药、输血史及妊娠史等因素也影响血型定型和交叉配血,在试验过程中要密切联系临床和环境因素,科学排除影响血型鉴定和交叉配血的因素,确保输血安全

ABO血型鉴定及交叉配血中出现错误常常是致命的,所以我们要随时保持警惕。

  1.分型血清方面的原因

  (1)自制分型血清抗体:效价太低、亲和力不强,造成定型不准确。

  (2)患者纤维蛋白原增高或为异常蛋白血症:如多发性骨髓瘤,巨球蛋白血症等,可产生缗线状假凝集。新生儿脐血中含有华顿胶或操作中使用了质量差的玻璃管(瓶),误认其脱下的胶状硅酸盐为串钱状凝集。

  (3)患者输入了高分子血浆代用品或静脉注射造影剂等药物:可引起红细胞聚集,易误认为凝集。

  (4)血清中可能存在的不规则抗体:如A2和A2B型患者血清内有抗A1抗体,能凝集A1红细胞。此外还有抗Ⅰ抗体等。有些癌症患者(如胃癌、胰腺癌等)血中含有大量可溶性A或B物质,这些物质可中和抗血清的抗体,从而抑制反应。造成假性不凝集。克服的办法是红细胞先洗涤后再试验。

  (5)婴儿尚未产生自己的抗体或有从母亲获得的血型抗体:新生儿不宜用血清作反定型。

  (6)老年人血型抗体水平下降:某些免疫缺陷的人或慢性淋巴细胞白血病,遗传性无丙种球蛋白血症以及有些用了免疫抑制剂的患者,由于免疫球蛋白下降,血型抗体也下降甚至缺如。可出现反向定型医学教育网收集整理错误。

  2.红细胞方面的原因

  (1)用近期内输过血的患者血液做对照红细胞:此时,患者血液红细胞为混合型细胞。

  (2)患者红细胞被大量抗体包被:例如某些自身免疫疾病或新生儿溶血病患者的红细胞,或红细胞悬浮于高浓度蛋白的介质中,红细胞都会自发地发生凝集。

  (3)红细胞膜有遗传性或获得性异常。

  (4)抗原变异:A或B的弱抗原易判为不凝集(假阴性),而由细菌引起的获得性类B抗原易误判为阳性。有些细菌含有乙酰基酶,能使特异性A型物质末端的N-乙酰氨基半乳糖水解成半乳糖,从而使A型获得类B抗原后易误定为AB型。由于患白血病或某些恶性肿瘤使A或B抗原变弱。婴儿及老年人的红细胞抗原也较青壮年为弱。

  (5)血清中有高浓度血型物质:当用血清配制红细胞悬液时,血型物质则会中和分型血清中的抗体,而不再与红细胞抗原起反应。

  (6)红细胞被细菌污染:细菌的酶消化了红细胞表面的唾液酸,医学教育网收集整理暴露了人人都有的T抗原,被具有抗T活性的IgM凝集。

  (7)嵌合体现象:混合细胞群见于异卵双生子。如,有98%O型红细胞,2%B型红细胞会定为O型,但血清中只有抗A抗体。

临床实验室

  3.操作方面的原因:是最常见原因。

(1)操作器材:玻璃器皿不洁或使用了严重污染的血清、红细胞,可出现假阳性。试管污染洗涤剂会造成假阴性。 临床实验室

(2)红细胞与血清比例和离心:红细胞与血清比例不当、过度离心或离心不足可引起假阳性或假阴性。

  (3)溶血现象:误认为溶血现象为阴性结果。

  (4)试验温度:温度过高会造成假阴性。ABO血型系统的IgM抗体最适温度为4℃~22℃,如达37℃凝集力即下降。